重复性实验，你会做吗

前言

前不久，笔者在设计一个化药项目的含量方法学验证方案时，准备按照常规的取20片，精密称定后，研细后，取粉末适量，依法制备供试品溶液。平行制备6份。后发现由于样品规格较小，取样20片样品研细后样品量无法称取6份样品。讨论后有两方案：1、取20片，精密称定后取得平均片重，取2*20片样品研细后（2份样品研细后混匀），取粉末适量，依法制备供试品溶液。平行制备6份。2、取6*20片，精密称定后，研细（研磨成6份样品），取粉末适量，依法制备供试品溶液。平行制备6份。两方案各执一词各有利弊，在方案一种认为取样40片与质量标准中取样量不一样；在方案2中认为取样研细为样品提取过程，不应此时进行验证。为此笔者对重复性的定义、实验等进行了一番研究。

一、定义：

ICH Q2（R1）分析方法验证：

精密度：分析方法的精密度是规定条件下对均质样品多次取样进行一系列检验结果的接近程度（离散程度）。精密度可以从三个层次考虑：重复性、中间精密度、重复性。精密度考察应使用均质、可信的样品。如果得不到，可用人为配制的样品或样品溶液进行研究。分析方法的精密度通常以多次测量结果的变异性、标准偏差或变异系统来表达。

重复性：在同样的操作条件下，在较短时间间隔的精密度，也称组内测量精密度。

中间精密度：实验室内部条件的改变，如不同日、不同实验分析者、不同仪器等情况精密度。

重现性：不同实验室之间的精密度。(合作研究，通常用于方法学的标准化)

中国药典2015版9101药品质量标准分析方法验证指导原则：

精密度系指在规定的条件下，同一份均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性；在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度，称为中间精密度；在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，称为重现性。

含量测定和杂质的定量测定应考察方法的精密度。

USP 1225 药典方法验证：

定义—分析方法的精密度是单个检测结果间的一致程度，当方法重复使用于同一样品的多个样品时。分析方法的精密度通常以一系列测量值的标准偏差或相对标准偏差（变异系数）来表示。精密度可以是在正常操作条件下，分析方法重现性和重复性程度的测量。在本文中，重现性指在不同的实验室使用分析方法，以共同研究的方式。中间精密度（通常也称为粗放性）表述的是在同一实验室范围内的变化，不同的天数，不同的分析人员或相同实验室内的不同仪器。重复性指的是在同一实验室内，一小段时间内，由同一实验人员在相同的设备上进行分析。

测量系统分析（MSA）参考手册第四版：

重复性（repeatability）是用一个评价人使用相同的测量仪器对同一零件上的同一特性进行测量所得到的的测量变差，他是设备本身的固有变差或能力。重复性是指在制定的测量条件下连续测量的原因（随机误差）的变差。重复性的最佳措辞为：当测定条件已被确定和定义-以确定的零件、仪器、标准、方法、操作者、环境和假设之下，系统内部的变差。

再现性（reproducibility）定义为有不同的评价人，采用相同的测量仪器，对同一仪器的同一特性进行测量所得的平均值的变差。再现性是指测量的系统之间或条件之间的平均值变差。

二、讨论

通过以上四个定义可以看出重